1、脱保护：将连接在固相载体CPG上核苷酸与三氯乙酸反应，脱去其5'-OH的保护基团DMT，获得游离的5'-OH。 2、耦连：将亚磷酰胺保护核苷酸单体，与活化剂四氮唑混合，得到核苷亚磷酸活化中间体，它的3'端被活化，5'-OH仍然被DMT保护，将活化好的中间体与溶液中游离的5'-羟基发生缩合反应。 3、盖帽：缩合反应中可能有极少数5'-羟基没有参加反应(少于2%)，用乙酸酐和1-甲基咪唑终止其后继续发生反应，这种短片段可以在纯化时分离掉。 4、氧化：在氧化剂碘的作用下，亚磷酰形式转变为更稳定的磷酸三酯。当天120bp引物第二天均可发货！

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常规荧光基团都可以合成例如FAM、hex、tamra、rox、cy5 cy3等，3-4天即可发货，质量稳定。

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